Slijedi pregled različitih koraka protokola indirektnog imunofluorescentnog bojenja
- Planiranje eksperimenta i priprema uzoraka. …
- Sample Fixation. …
- Cell Permeabilization. …
- Blokiranje. …
- Primarna inkubacija antitijela. …
- Sekundarna inkubacija antitijela. …
- Protivboj i montaža.
Kako izvodite imunofluorescenciju?
Svi koraci inkubacije se odvijaju na sobnoj temperaturi
- Operite ćelije dvaput i pincetom pažljivo stavite pokrovno staklo sa prevrnutim ćelijama u vlažnu komoru.
- Popravite sa 4% formaldehida 10 minuta i operite 3 ×.
- Permeabilizirajte sa 0,1% TX-100/PBS 15-20 minuta i operite 3 ×.
Kako se koristi imunofluorescencija u ćeliji?
Protokol imunofluorescencije za adherentne ćelije
- Sjeme 1–1,5 x104 ćelije po jažici stakalca sa 4 komore u 500 mL medijuma za kulturu. Inkubirajte na 37°C na 5% CO2.
- 32-36 sati nakon zasijavanja ćelija, uklonite podlogu za ćelijsku kulturu i isperite ćelije 3 puta koristeći 500 µL 1X PBS.
Šta je primjer imunofluorescencije?
Na primjer, istraživač bi mogao stvoriti primarna antitijela u kozi koja prepoznaju nekoliko antigena, a zatim koristiti bojom spregnuta zečja sekundarna antitijela koja prepoznaju konstantnu regiju kozjih antitijela (" zečja anti-kozja" antitela).
Koja je upotreba imunofluorescentnog bojenja?
Imunofluorescentno (IF) bojenje je široko korištena tehnika u biološkim istraživanjima i kliničkoj dijagnostici IF koristi fluorescentno označena antitijela kako bi otkrila specifične ciljne antigene. Nakon toga slijedi slikanje, to je vrlo direktna tehnika jer nešto možete vidjeti.
