Bimolekularna fluorescentna komplementacija (BiFC) je metoda koja se koristi za direktnu vizualizaciju interakcije protein-protein in vivo koristećisnimanje živih ćelija ili fiksnih ćelija. … BiFC su prvi opisali Hu et al.
Kako funkcionira bimolekularna fluorescentna komplementacija?
Princip rada BiFC-a zasniva se na razvoju fluorescentnog kompleksa, kao rezultat asocijacije dva segmenta fluorescentnog proteina kada su u neposrednoj blizini zbog interakcije protein-protein u fragmentima, tj., u BiFC-u, fluorofor je podijeljen na amino i karboksilne terminalne krajeve.
Šta je BiFC test?
bimolekularna fluorescentna komplementacija (BiFC) test omogućava jednostavnu i direktnu vizualizaciju proteinskih interakcija u živim ćelijama (45). BiFC pristup se zasniva na formiranju fluorescentnog kompleksa kada dva proteina spojena sa nefluorescentnim fragmentima fluorescentnog proteina međusobno interaguju (sl.
Zašto se radi BiFC test?
Ideja BiFC-a je izražavanje polovica GFP-a spojenih sa vašim interesantnim proteinima Ako POI interaguju, možete spojiti obje polovine kako biste dobili funkcionalni GFP. Dakle, ako postoji jedna polovina GFP-a izražena u ćeliji, nisam iznenađen da ga GFP antitijelo može otkriti.
Da li je BiFC reverzibilan?
Ireverzibilnost BiFC kompleksa je dobro dokumentirana (10) i čini se da je većina, ako ne i svi, BiFC sistemi zasnovani na fluorescentnom proteinu ireverzibilni (8, 33, 43, 48–51).