Da biste mogli izvući pigmente iz hloroplasta su suspendovani u izolacionom puferu. Da bismo mogli izvući pigmente iz hloroplasta, prvo se moramo riješiti pufera. Koji je najbolji način za odvajanje hloroplasta od pufera? koristite centrifugu da odvojite
Kako izolirati hloroplast?
U metodi izolacije hloroplasta, ćelijski zid se razbija mehanički pomoću blendera ili homogenizatora. Zatim se filtriranjem uklanjaju neprekinuto lisno tkivo i ćelijski ostaci. Hloroplasti se sakupljaju centrifugiranjem korištenjem gradijenta percoll.
Kako napraviti pufer za izolaciju hloroplasta?
Pripremite potrebnu količinu 1X Chloroplast Isolation pufera razrijedite 2X pufera 1:1 sa dH2O vodom Dodajte 10 µL 10% otopine BSA po mL 1X Chloroplasta Isolation Buffer. Neposredno prije upotrebe dodajte 1 µL DTT na 1 mL pufera za izolaciju hloroplasta. Označite ovaj međuspremnik kao 'Complete Buffer'.
Šta je u puferu za izolaciju hloroplasta?
DNK pufer za izolaciju sastojao se od 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA i 1 mM DTT Liza hloroplasta je dobijena inkubacijom peleta hloroplasta sa 8 ml pufera za izolaciju DNK, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanola i 30 µl proteinaze K (10 mg/ml) u epruvetu za centrifugiranje na 55°C 4 h.
Koji je pH pufera koji se koristi za homogenizaciju lista spanaća u protokolu za izolaciju hloroplasta?
Spinat je pun dobrih hloroplasta i oni se lako izoluju. Listove ćete morati staviti u hladni blender sa 0,1 M fosfatnog pufera, pH 7,5 i 0,5 M saharoze da ne puknu.
